摘要:空气中细菌的检测一直是环境卫生与公共健康的重要内容之一。空气中存在着细菌,真菌,病毒,放线菌等多种微生物细菌是一类微生物,它们广泛存在于自然界中,因此,对空气中微生物的检查与检测,对于预防疾病的传播和保障公共健康有着重要的意义。
配制适量的基础培养基(1g牛肉膏、2g蛋白胨、1g氯化钠、3g琼脂及200ml蒸馏水)。
第二步:对培养基进行灭菌(高压蒸汽灭菌锅121摄氏度,30分钟)并对所需器材和试剂进行消毒。
第三步:待培养基冷却至48摄氏度左右时,在超净工作台内完成倒平板操作。注意倒平板前需将双手用酒精消毒,倒平板操作时需全程在点燃的酒精灯旁操作。
第四步:设置未清洁、水洗及酒精消毒三组,在空气中暴露1min。注意需设置一空白平板进行对照。
第五步:将平板放进培养箱培养24-48小时,观察培养基落菌情况,菌落形态及数量。
此次实验目的基本完成,但仍存在一些误差,本实验采取一个培养基无菌作为对照组,另外五个作为实验组,其中有一个培养皿没有生长出细菌,由于倒培养基操作时培养液倾倒过少,导致无法满足细菌生长代谢繁殖的所需能量,而另一组则长出了呼吸道内的杂菌,是由于操作时操作者不慎咳嗽将菌注入培养皿中,这些失败给我们铭记操作规范。
此次实验旨在通过对空气中微生物的采样与培养为环境卫生的检测提供科学依据,让同学们对培养基的配置、高压蒸汽灭菌锅的使用、倒平板的规范操作、超净台的使用和培养箱的使用更加熟练,让同学们对实验有了了解,喜欢探究原理,对实验室内的各类电器学极品粉嫩午夜福利在线播放使用和保护。在结束实验后的分析中,我们存在一些不足和错误,例:灭菌操作有误,导致培养基灭菌不够彻底,基内长菌,实验失败重做。
在未来,我们要对实验操作更了解,对实验的每一步要更严谨,不断改进。
6月4日,我们在曹雅丽老师的带领下,经过前几次的学习,我们对菌落总数测定有了一定的了解。本次实验我们进行土壤中所含微生物的测定。
配置牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏0.75-1.25g、蛋白胨2.5g、NaCl 2.5g、琼脂粉3.75-5.0g、蒸馏水250ml。
操作步骤:
(1) 称量
按实际用量计算后,准确称取各种药品,放入烧杯。牛肉膏可放在硫酸纸上称量,称好后连同硫酸纸一起放人烧杯。烧杯中加适量蒸馏水,将硫酸纸上的牛肉膏用水洗下后,弃去硫酸纸。(蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速,称量结束后及时盖上瓶盖)
(2) 溶解
在烧杯中加所需要的水量,小火加热,并用玻璃棒搅拌,待药品完全溶解后,将称好的琼脂放入已溶解的溶液,加热融化,此过程中需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足水分。
(3) 调pH
逐滴加1mol/L NaOH,调节pH为7.2-7.6,应注意 NaOH溶液不要滴加过量,以免用1mol/L HCI回调后影响培养基内各离子的浓度
(4) 分装
按实验要求,将配制的培养基分装入试管或三角瓶。固体培养基分装量以不超过试管高度的1/5、三角瓶容积的1/2为宜(图7-2)。
(5) 加塞、包扎
试管口和三角瓶口塞上棉塞或硅胶塞,加塞后,在棉塞或硅胶塞外包扎一层牛皮纸。
(6) 灭菌:把包扎好的试管和三角瓶置于高压蒸汽灭菌器内,121.3℃灭菌15-30分钟,灭菌后,趁热制成斜面或平板。
(7) 无菌检查
将斜面或平板抽样置于37℃培养箱内,培养24-28小时,证明无菌生长后才能使用。
证明培养基无菌后,清洗实验所需器材,如:1个250ml锥形瓶、5支1.8*18cm试管(标号①②③④和“空白”)、5支1ml移液管、玻璃棒、10个培养皿(侧面标有10-1、10-2、10-3、10-4和“空白”各两个)等。后配置微生物生长生理盐水,准确称取2.125gNaCl,加入250ml蒸馏水搅拌使其充分溶解。在锥形瓶中加入90ml生理盐水,5支试管中合加入9ml生理盐水,将锥形瓶、试管、移液管包扎好后连同培养皿一起放入高温蒸汽灭菌锅内进行灭菌(121摄氏度,30分钟)。在等待的过程中可对超净工作台进行灭菌杀毒处理。
灭完菌后待生理盐水冷却至室温后,将10g土壤样品放入装有生理盐水的锥形瓶中。混匀后静置,等待泥水分离。
梯度稀释法:用移液管移取1ml泥水溶液于①号试管中,并反复吹打3-5次,使生理盐水与泥水充分混匀。然后,用一根新的洁净的移液管移取1ml①号试管中的溶液于②号试管,反复吹打混匀。重复上述操作直至四支试管中都含有泥水混合液。标有“空白”的试管不做处理。
融培养基:将培养基放在电炉上加热溶解,然后在室温下冷却一段时间后把培养基放入事先设置好的48℃水浴锅中水浴加热。
倒平板:右手持盛培养基的锥形瓶置火焰旁边,瓶口保持对着火焰。左手拿无菌培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝,迅速倒入培养基约20mL,加盖后轻贴桌边将培养皿慢推至桌面上,轻旋转平板使培养基均匀分布在培养皿底部,待凝后即为平板。
菌种计数:平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的,也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时,先将待测样品作一系列稀释,再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中,使其均匀分布于平皿中的培养基内,经培养后,由单个细胞生长繁殖形成菌落,统计菌落数目,即可换算出样品中的含菌数。
计数规则可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。
选取菌落数30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
此次实验使我收获颇多,通过这段时间的实验我学极品粉嫩午夜福利在线播放了如何检测土壤中的微生物、梯度稀释法等。实验不仅是一种学习方法,更是一种思维方式。通过实验,我深刻体极品粉嫩午夜福利在线播放到了理论与实践相结合的重要性。实验让我明白了,知识不是死的,而是活的,只有将知识应用于实际,才能发挥其真正的价值。同时,实验也让我感受到了探索的乐趣,激发了我对知识的渴望。总体而言,实验是学术研究的重要手段,通过实验,我们不仅可以验证理论,还可以发现新的知识。在未来的学习和工作中,我将继续积极参与实验,不断提高自己的实验能力。同时,我也将注重实验与理论的结合,将所学知识应用于实际,为社极品粉嫩午夜福利在线播放的发展做出贡献。总之,实验是一种宝贵的资源,是我们探索未知、实现梦想的阶梯。通过实验,我们不仅能够提高自己的能力,还能够为社极品粉嫩午夜福利在线播放的发展做出贡献。让我们珍惜每一次实验的机极品粉嫩午夜福利在线播放,用心去感受实验的魅力,用实验去书写我们的人生。
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